流動(dòng)相因素，樣品因素與其他因素。色譜柱使用過程中應(yīng)該注意這些因素，才能有效增加使用壽命。

　　一、流動(dòng)相因素

　　1、流動(dòng)相pH

　　不同基質(zhì)的填料具有不同的pH適用范圍。常溫下無定形硅膠在純水中的溶解度約為100 mg?L - 1 ，且在pH 1～9的范圍內(nèi)溶解的硅膠量幾乎是常量，考慮到溶解速度的影響，對于硅膠基質(zhì)的填料，其所能承受的流動(dòng)相pH范圍約為1～8。鍵合相硅膠填料則由于鍵合層的屏蔽作用，使填料對流動(dòng)相的適應(yīng)范圍大大增加，如現(xiàn)在廣泛使用的反相色譜填料C1 8 (十八烷基硅烷鍵合硅膠) ，其pH適用范圍可達(dá)2～10。當(dāng)流動(dòng)相pH值超出酸性范圍時(shí)，鍵合相易發(fā)生水解而流失；當(dāng)流動(dòng)相pH超出堿性范圍時(shí)，會(huì)加速硅膠的溶解而釋放出絮狀物堵塞柱子，這兩種反應(yīng)均是不可逆反應(yīng)，特別是在溫度較高( > 40℃)的環(huán)境下，會(huì)使柱效迅速降低而報(bào)廢。

　　2、流動(dòng)相變質(zhì)

　　當(dāng)前使用最為廣泛的是硅基鍵合相填料，當(dāng)以水溶液作為流動(dòng)相或流動(dòng)相中含有一定濃度的磷酸鹽緩沖液時(shí)，水溶液中或緩沖鹽溶液中會(huì)滋生出一些細(xì)菌或霉菌，從而堵塞固定相顆粒間的空隙。特別是對于多元自動(dòng)比例混合的高效液相色譜儀來說，水相或緩沖鹽相獨(dú)立存貯，因存放時(shí)間較長而容易發(fā)生此類問題。

　　3、流動(dòng)相純度

　　目前廣泛使用的填料顆粒粒徑范圍在3～10μm，孔徑在6～10 nm，hplc色譜柱在使用中會(huì)有大量的流動(dòng)相通過，如流動(dòng)相含有微量不溶性雜質(zhì)顆粒，則很容易在柱頭部位被截留，久而久之，造成色譜柱機(jī)械性堵塞，引起柱壓升高而無法正常使用。

　　4、其它因素

　　如流動(dòng)相的極性對柱子也有一定影響，甲醇、水、冰醋酸等極性較大的物質(zhì)會(huì)破壞硅膠填料柱，正丁醇、二氯甲烷等極性小的物質(zhì)會(huì)破壞化學(xué)鍵合硅膠柱，堿性溶液會(huì)破壞陽離子交換樹脂色譜柱，酸性溶液容易損壞陰離子交換樹脂柱。

　　二、樣品因素

　　1、樣品的溶解性

　　樣品試樣在配制中，如有少量微粒未能*溶解，則會(huì)隨試樣一起進(jìn)入色譜柱，同樣會(huì)沉積在柱頭處，造成色譜柱的堵塞。

　　2、樣品的純度

　　樣品中可能含有待分析組分以外的各種組分或雜質(zhì)，這些組分或雜質(zhì)可能會(huì)在柱內(nèi)產(chǎn)生不可逆吸附，從而使固定相的活性點(diǎn)被覆蓋，保留特性發(fā)生變化。

　　3、樣品的化學(xué)性質(zhì)

　　待測試樣中的各種組分與填料之間應(yīng)具有化學(xué)穩(wěn)定性，比較典型的是在使用氨基鍵合柱時(shí)，應(yīng)避免使用含羰基的化合物和流動(dòng)相，如丙酮、乙酸乙酯等，以免固定相中的NH2 和酐、酮發(fā)發(fā)希夫( Schiff)縮合而使固定相破壞。

　　三、影響色譜柱產(chǎn)品壽命的其它因素

　　影響hplc色譜柱壽命的因素很多，除流動(dòng)相和樣品因素外，還有其它一些外在因素，如柱壓的影響，溫度的影響，色譜柱的正確沖洗，色譜柱的正確安裝等。