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制備柱具有各種尺寸,可以實現(xiàn)高分辨率分析和快速的分析。在制備色譜中,達到高純度、高回收率和高通量的分離十分重要。制備柱主要應(yīng)用在植物化學(xué)、藥物合成、生物化學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品的提取及純化工作中。不同的工作領(lǐng)域中組分的制備和純化量的差異較大。在生物技術(shù)領(lǐng)域中,酶的分離是μg級;在天然產(chǎn)物化學(xué)和合成化學(xué)領(lǐng)域中,為應(yīng)對未知成分定性鑒別、結(jié)構(gòu)測定、生物活性測試等要求,需要純化若干mg級的高純物;在藥品和醫(yī)藥學(xué)測試中,需要g級的標(biāo)準(zhǔn)品和對照品;在工業(yè)級提純中,目標(biāo)產(chǎn)物工業(yè)化生產(chǎn)往往需要kg級...
一、分離模式選擇色譜柱的首要任務(wù)是選擇分離模式。分離分子的方法有很多,其中應(yīng)用*泛的包括反相、正相、親水相互作用、離子交換和尺寸排阻HPLC。還有一些不太常見但更專業(yè)的分離模式,例如使用手性固定相或流動相的特定手性色譜。反相色譜柱通常用于非極性或弱極性有機化合物,它包含非極性固定相(如C18),通常與極性流動相配對。恒譜生C18AQ反相色譜柱在水下?lián)碛?產(chǎn)品的壽命,適于極性較大的物質(zhì)在高水相條件下的分析。但是該方法不適合應(yīng)用于蛋白質(zhì),流動相通常含有低pH值的乙腈或甲醇,可能會...
當(dāng)保護柱或色譜柱的壓力漸升時,可通過以下方法對問題配件進行清洗再生。注意:清洗色譜柱時需要將保護柱和抑制器、電導(dǎo)池取下,連接順序是泵→六通閥→色譜柱(需要反接)→廢液管;清洗保護柱時需要將色譜柱和抑制器、電導(dǎo)池取下,連接順序是泵→六通閥→保護柱(需要反接)→廢液管親水性離子污染按以下步驟沖洗(流量0.5mL/min)1、反接柱子(保護柱或色譜柱)注意:一定要將抑制器從流路中斷開,避免損壞抑制器。2、100分鐘:10倍淋洗液濃度的溶液(起清洗作用的主要是Na2CO3)3、100...
將色譜柱保持在最佳狀態(tài)將大大有助于改進和標(biāo)準(zhǔn)化您的分離操作,同時確保色譜柱的使用壽命。您可以采取以下措施來實現(xiàn)這一目標(biāo)。一、注意清潔。如果您從一開始就注意并定期清潔,那么色譜柱的使用壽命會更長。清潔色譜柱所需的溶劑、酸或堿的類型取決于它們的設(shè)計和吸附劑的具體類型。雖然有些色譜柱需要使用氫氧化鈉,但該溶液會損壞其他色譜柱中的吸附劑。請按照色譜柱的說明書進行操作。二、儲存條件也很重要。很多人沒有考慮如何存儲液相色譜柱,細菌會在緩沖液的中性環(huán)境中成長。通過水流過色譜柱來防止細菌生長...
液相色譜的保護柱,顧名思義是用來過濾樣品和流動相中的雜質(zhì),保護色譜柱,延長色譜柱的使用壽命的安裝位置通常在進樣器之后,色譜柱前端。保護柱再選擇時分兩種:一種是獨立式卡套保護柱。卡套內(nèi)放有柱芯,柱芯內(nèi)含有填料,柱芯可以更換,而柱芯是根據(jù)色譜柱的類型來選擇的。另一種是一體化卡套保護柱。這是一種特殊的色譜分析柱構(gòu)造,色譜柱前端是一體化的,可以直接打開保護柱卡套。這種保護柱帶來的死體積較小,但是分析柱選擇時成本較普通分析柱更高。值得注意的地方,保護柱的柱芯除了需要根據(jù)色譜柱的類型進行...
初次將UHPLC用于小分子分離時,能得到很好的峰形,但是蛋白質(zhì)峰的分離幾乎沒有那么好,因此通常不可能顯著縮短運行時間。然而,最近對蛋白質(zhì)進一步改進讓UHPLC可以提供更好的分離度和更短的運行時間。雖然UHPLC不能讓科學(xué)家始終看到蛋白質(zhì)之間的所有差異,但它可以讓他們看到一些差異——例如,在大體形態(tài)、二硫化物異構(gòu)體、脫氨基作用和蛋白質(zhì)折疊方面。蛋白質(zhì)研究人員使用不同的色譜模式來實現(xiàn)這一目標(biāo),例如反相色譜(RPC)、離子交換色譜(IEX)和尺寸排阻(SEC)色譜。為了成功分離出蛋...